Obiettivi formativi
Il corso si propone di introdurre le tecniche avanzate di Biologia Molecolare impiegate per l'isolamento di geni eucariotici e lo studio della loro espressione, e per la produzione e modificazione di proteine ricombinanti nel batterio E.coli. Verrano inoltre presentate le procedure per l'espressione di geni esogeni in organismi eucariotici unicellulari e pluricellulari, incluse quelle utilizzate nella realizzazione di organismi transgenici.
Prerequisiti
Nessuno
Contenuti dell'insegnamento
- Isolamento di un gene specifico (cDNA, regione del genoma che lo contiene).<br />
- Analisi trascrizionale del gene di cui è stato isolato il cDNA.<br />
- Analisi della struttura della regione del genoma contenente il gene di interesse. <br />
- Espressione in batteri della proteina codificata dal gene.<br />
- Mutagenesi del gene e della proteina ricombinante che esso codifica.<br />
- Sintesi chimica di DNA e creazione di geni artificiali.<br />
- Clonaggio genico in batteri diversi da E.coli.<br />
- Espressione di proteine eterologhe in B.subtilis<br />
- Espressione di proteine eterologhe in Streptomyces<br />
- Clonaggio genico in S.cerevisiae e altri funghi<br />
- Espressione di proteine eterologhe in S.cerevisiae<br />
- Espressione di proteine eterologhe in P.pastoris<br />
- Preparazione di genoteche di espressione in lievito<br />
- Complementazione funzionale in S.cerevisiae<br />
- Knock-out genico in lievito<br />
- Sistema dei due ibridi<br />
- Clonaggio genico in cellule animali<br />
- Vettori plasmidici per l’espressione transiente(con e senza repliconi)<br />
- Vettori plasmidici per l’espressione stabile (con repliconi e di integrazione)<br />
- Co-trasformazione e amplificazione genica<br />
- Effetto posizione e rimedi<br />
- Trasduzione virale<br />
- Sistema del baculovirus e del virus vaccinia<br />
- Adenovirus, AAV e retrovirus<br />
- Preparazione di animali transgenici<br />
- Trasfezione di cellule ES di topo<br />
- Trasferimento nucleare e clonaggio di interi organismi<br />
- “Gene-targeting" e "knock-out" genico in animali.<br />
- Ricombinazione sito-specifica in cellule animali<br />
- Mutagenesi sito-specifica in cellule animali<br />
- Ingegneria cromosomica<br />
- Mutanti condizionali in topo<br />
- Knock-out funzionale (RNA interference, ribozimi)<br />
- Sistemi di espressione inducibili in animali
Programma esteso
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Bibliografia
Ingegneria genetica. Principi e tecniche. S.Primrose et al. - Zanichelli<br />
DNA Ricombinante - J.D.Watson et al. - Zanichelli
Metodi didattici
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Modalità verifica apprendimento
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Altre informazioni
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